臭氧去（qù）除食品加工設備中的熒光假單胞菌生物膜的研究

食品加工環境和設（shè）備內生物膜的形成（chéng）增加了產品變質和病原體汙染的風險。就地（dì）清（qīng）洗(CIP)操作在去除土壤和消毒處理（lǐ）設備(包括（kuò）消除生物膜)方（fāng）麵（miàn）非常有用。然而，CIP是一個資源密集型的過程，特（tè）別是（shì）在（zài）化學洗滌劑，熱和消毒劑的使用方麵。本研究旨在探討將（jiāng）臭氧整合到CIP操作中的可行（háng）性，以促（cù）進假單胞菌生物膜的消除，其長期目標是減少（shǎo）對傳統清潔和消毒試劑的依賴。為了研究臭氧與CIP的結合（hé），在一個中試食品加工設備上，在10%脫脂牛奶(脫脂牛奶-水混（hún）合物，1:9 v/v)中培養2天，在靜止條件下培養出熒光假單（dān）胞菌，然後在添加10%新鮮脫脂牛奶的情況下再循環5天。CIP采用22-25℃水（shuǐ）洗，50℃0.2%氫氧化鉀堿性清（qīng）洗，很後用（yòng）水衝洗。這些CIP操作將浮遊細胞（bāo）數量減少（shǎo）到低於檢測方法的極限，但並沒有從（cóng）加工設（shè）備的光滑或粗糙表麵完全（quán）去除熒光假單胞菌生物膜。當CIP過程（chéng）之後應用含水臭氧步驟(10 ppm, 10分鍾)時，處理減少了光滑和（hé）粗糙表麵的生物膜細胞數量，低於回收方法的檢測限(分別為0.9和1.4 log CFU/ 100 cm2)。這些結果證明了臭氧輔助CIP在去除加工設備上（shàng）的微生物生物膜方麵的效用，但需要進一步研究以優（yōu）化清洗劑的使用和臭氧的應用。

1. 介紹

在（zài）食品加工環境（jìng）中，對致病（bìng）菌(如假單胞菌和單核增生李斯特（tè）菌)的控製一直（zhí）是一個難點。在適當的水分和營養條件下，這些細菌可以在食品加工設備上快速形成生物膜(Brooks and Flint, 2008)。由此產（chǎn）生的生物（wù）膜是食品（pǐn）重複汙染的持續來源，這在很大程度上影響了產品的保質期和安全性。事實上，生物膜在食品行業（yè），特別是乳製品（pǐn）行業中的作用已經得到了廣泛的（de）研究(Panebianco等人，2022)，研究人員發現，細菌可以在乳製品加（jiā）工操作（zuò）的幾個環節和加工設備的許多部分形成生（shēng）物膜(Marchand等人，2012)。變質微生物如假單胞菌的生物膜被認為是乳（rǔ）品加（jiā）工操作中的一個（gè）具有挑戰性的問題。假單胞菌屬的成員無處不在，經常從乳製品生產設備或乳製品中分離出來。假單胞菌產（chǎn）生（shēng）耐（nài）熱脂肪酶和蛋白酶，這些酶（méi）在牛奶熱處理後會持續存在，從而通過產生不良風味和氣味導致（zhì）很終產品變質(Zhang等人，2019)(Reichler等人，2021)。幾種假單胞菌通常從乳製品工廠分離出（chū）來;其中包括熒光假（jiǎ）單胞菌（jun1）、fragi假單胞菌、惡臭（chòu）假單胞菌、嗜蟲假單胞（bāo）菌和銅綠假單胞菌(Chiesa et al.， 2014)。

就地清洗(CIP)操作旨在通過盡量減少加工過程中的產品再汙染來確保加（jiā）工食品的安（ān）全(Seiberling, 1997)。CIP係統去（qù）除設備內部表麵沉積的材料，無需打開或拆卸設備，很少（shǎo）或根本不需要人工操作（zuò）(Smithers, 2022)。傳統的CIP操作（zuò）在去除食品接觸（chù）麵上形成的生物膜的效果上各（gè）不相同(Dufour等，2004)。這種操作通常由（yóu）以下步（bù）驟組成:(1)用水衝洗;(2)堿清洗，或不加酸洗;(3)衛生處理。消毒步（bù）驟的設計是為了保持設備（bèi）足夠的衛生條件。這一（yī）步驟通常涉及使用殺菌劑，包括氯、過氧乙酸、碘劑或季（jì）銨化合物(Joseph et al.， 2001)。然而，處於生物膜狀態的細菌可以對這些殺菌劑的抗菌作用產生保護作用(Srey et al.， 2013;Wassenaar et al.， 2015)。大量使用這些殺菌劑可能（néng）會對人類健康產生負麵影響，並導致加工設備惡（è）化(Marino et al.， 2018)。作為一種替代（dài）消毒劑，臭氧在食品工業中已被（bèi）廣泛應用，並被批準用於（yú）食品處理、儲（chǔ）存和加工(食品和藥物管理（lǐ）局，2001年)。臭氧的特點是對許多致病性和腐敗（bài）微生物具有（yǒu）很強（qiáng）的抗菌活性，並因其對環境的影響很小而被認為是一種環保消（xiāo）毒劑(Pascual等人，2007;Marino et al.， 2018;Masotti等人，2019;Bigi et al.， 2021)。臭氧通過多種機製破壞微生物的細胞質膜和其他（tā）細胞成分，包括氧化不飽和脂質、蛋（dàn）白質和核酸，從而使微生物失活(Khadre et al.， 2001)。臭氧還可以阻止微生物細（xì）胞（bāo）與表麵的（de）初始附著，並通過破壞參與細胞的細胞外基（jī）質來抑製生物（wù）膜（mó）的形成(Panebianco et al.， 2022)。

假單胞菌在加工環境中形成生（shēng）物膜是食品（pǐn）工業中一個相當大的問題，它可能導致產品變質和疾病爆發(Srey等人（rén），2013)。關於假單胞菌生物（wù）膜在工業環境下（xià）的生成和臭氧對這種生物膜的使用的係統研究是缺乏的。因此，本研究的目的是:(1)研究當脫脂牛奶(乳製品的一個例子)作為營（yíng）養來源時，熒光杆菌在中試規模（mó）的食品加工設備上形成堅固的生物膜的（de）能力;(2)評估（gū）在CIP淨化過程中使用臭氧作為（wéi）消毒劑的生（shēng）物膜控製技術的效果。

2. 材（cái）料與方法

2.1. 臭（chòu）氧（yǎng）輔助就地清洗係統

臭氧輔助CIP係統(圖1)是俄亥俄州立大學的研究人員（yuán）和一家臭氧（yǎng）設備製造商(Del ozone, San Luis Obispo, CA)合作（zuò）為本研究定（dìng）製的。該係統(圖1)由一個132升的容器(用於存放漂洗水)，三個57升的容器（qì）(用於（yú）存放堿性（xìng）溶液，酸性溶液和消毒劑)，一個熱交換器（qì）(型（xíng）號:STFT-6000-240;TruHeat, Richmond Hill, ON, Canada)，一個泵，以及測量湍流，溫（wēn）度，pH值和電導（dǎo）率的儀表（biǎo）。離心（xīn）泵(Gould離心泵，型號NPE 1ST1F5B6, Seneca Falls, NY)用於將CIP流體循環到中試規模的食品加工設備，並由GS AC Drive (Automation Direct, Cumming, GA)調節。監測和數（shù）據采集使用兩（liǎng）個流量計(Blue-White Industries F-1000, Huntington Beach, CA)，兩個熱電偶(Omega, Stamford, CT)，一個pH計(Jenco Instr。(Emerson/Rosemount Analytical Model 1056 Dual Input Analyzer, Shakopee, MN)，兩（liǎng）個電（diàn）導率探頭(Emerson)。這些探頭被放置在CIP係統的入口和返回線中，與加工設備相關。CIP設備的設（shè）置方式是，通過打開（kāi）適當的閥門（mén），CIP泵可以從（cóng）任何單個容（róng）器(水，堿性（xìng），酸性或消毒劑)中抽出流體，並通（tōng）過（guò）噴霧球（qiú）將流體引導到加工設備;然後，水流將流經所有的加工（gōng）生產（chǎn）線，並將水返回到啟動水箱，或者簡單（dān）地通過加熱（rè）器將水再循環並返回到水箱以控製溫度。臭氧衛生係統(Del ozone AGW 4045)具有內置臭氧發生器和控製器(Del ozone Genesis CD-45GV)，與（yǔ）CIP係統集成在一起（qǐ）。滑板的臭氧部分有自己的循環回路，帶有第二個泵(型號:NPE 1ST1F1B4，古爾德泵)，在使用過程中不斷產生和維持臭氧（yǎng）化水。臭氧係統（tǒng）的設置使CIP泵可（kě）以從主臭氧水罐中抽取水。

圖1.代表與臭氧發生器集成並結合中試規模食品加工設備的中（zhōng）試規（guī）模原（yuán）位清洗係統。

2.2. 中試食品加工設備

CIP係統連接到模擬食品加工設（shè）備的中試裝置上，該設備由304級（jí）不鏽鋼製成(圖2)。加工設備的構造便於在清洗過（guò）程中連接到CIP係統。加工設備包括（kuò）:(a) 190-L的罐(容（róng）器)，(b)放（fàng）置在較大管道內的填料閥，(c)管三通，(d)旁通管線，(e)四個（gè）小管段(內徑（jìng）2.54 cm，長5.08 cm，內表麵積40.5 cm2)，使用粗砂碳化矽球筒磨具(Brush Research manufacturing, CA)人工製造表麵粗糙的管段，(f)四個（gè）90°彎（wān）頭(內徑2.54 cm，內表麵積117.0 cm2)，表麵（miàn）光滑，(g)回流泵(古爾德泵)，型號NPE 1ST1C5E6)，和(h) 7.6米(25英尺)的2.54厘米直徑（jìng）管。

圖2.實驗裝置的表示，包括用於（yú）汙染中試規模加（jiā）工設備和在不鏽鋼表麵上開發乳品（pǐn）生物膜的結垢係統。汙垢設備由以下部分組成，如（rú）圖所示：（1）19-L高密度聚乙烯容（róng）器，（2）帶4.8毫米穿（chuān）孔的（de）內部過濾器，（3）在線路上的三個外部過濾器，網孔（kǒng）尺寸為20，40和40，（4）循環蠕動泵，（5）進（jìn）料管路蠕動泵，（6）5-L進料（liào）瓶， （7）插（chā）入氯丁橡膠管的（de）小不鏽鋼管。加工設備的組成包括：不鏽鋼T型管（8），旁通閥（9），填料（liào）（10），旁通管（11），四個粗糙（cāo）表（biǎo）麵管段（12）和四個光（guāng）滑（huá）表麵90°彎頭（13）。

2.3. 汙染係統

所需的實驗生物膜需要是（shì）堅固的，並模（mó）擬當食品加工設備的清潔被忽視（shì）或效率低下時自然會（huì）發生的情（qíng）況。為了使研究易於管理和實驗可重複，生物膜在7天的過程中生成。為了生（shēng）成這種生物膜，研究人員開發了一種汙染係統，該（gāi）係統由（yóu）一個19-L高密度聚乙烯容器組成，該容器可容納7.6 L接種的生長培養基，然後在係統（tǒng）中緩慢循（xún）環（huán）。該設備有一個（gè）四步過濾（lǜ）係統，可以在流體流到（dào）達泵之前將較大的顆粒從流體流中去除。第一個過濾器作為吸力過濾器放置在容器內(4.8 mm穿孔;麥（mài）克馬斯特-卡爾，哥倫布市，俄亥俄州)。其他三種過濾器(濾網尺（chǐ）寸（cùn）分（fèn）別為20、40、40;麥克馬斯特-卡爾)是外部的容器，設計用於在汙染運行（háng）過程中（zhōng）拆卸和（hé）清潔，而無需（xū）拆卸整個係統或排水。通過過濾器後，流體進入蠕動泵(Masterflex型號:7553-70;Masterflex頭型號:7015;Barrington, IL)，它被指定為“循環泵”，通過目（mù）標處理設（shè）備部件傳輸汙染流（liú）體(圖2)。第二個5-L儲液（yè）器包（bāo）含滅菌介質，連接到第二個蠕動泵(Masterflex型號:7521-50;機頭型號:7016;Masterflex)被綁在汙染係統的輸入線上，慢慢地添加新鮮培（péi）養基，以保持（chí）生物體在多天的孵化中（zhōng）生（shēng）長。汙垢係統包含（hán）多個（gè）小的不鏽鋼管(每根內徑為6.35 mm，長9.05 mm，內（nèi）表麵積為3.78 cm2)插入（rù）壬二（èr）烯管(06402-15;科爾·帕（pà）默，弗（fú）農山莊，伊利諾伊州);這些（xiē）試管用於檢測熒光假單胞菌汙染期間生物膜形成的穩健性。

2.4. 熒光（guāng）假單胞（bāo）菌培養物的製備

熒光（guāng）假單胞菌ATCC 25289來（lái）自俄亥俄（é）州立大學（xué）(Columbus, OH)微生物（wù）係的培養（yǎng）標本。將細菌的（de）冷凍培養基傳代於胰酶豆湯(TSB;Becton Dickinson & Co.， Sparks, MD)，並在搖床培養箱(New Brunswick Scientific Co. Edison, NJ)中輕度攪拌，在30°C下孵育48小時。將熒光假單胞（bāo）菌培養（yǎng）物鋪在胰蛋白酶大豆瓊脂(TSA)上;Becton Dickinson & Co.)，在環境（jìng）溫度(22-25°C)下孵育48小時，然後在TSB中傳代，然後用（yòng）於實驗(Meyer和Abdallah, 1978)。

2.5. 熒光假單胞（bāo）菌生物膜發育（yù）

為了誘導生物膜的形成，在7.6 l容量的汙染係統中進（jìn）行如（rú）下操作。脫脂牛奶(Kroger Co.， Cincinnati, OH)， 760 mL，用蒸餾（liú）水稀釋至總積7.6 L，然後在121°C高壓滅菌30分（fèn）鍾（zhōng）;這將被稱為“生物膜培養基（jī）”。生物膜培（péi）養基冷卻至室溫(22-25℃)後，接種38 mL (0.5% v/v) P. fluorescens ATCC 25289培養物。接種的生物膜（mó）培養（yǎng）基在循環中循環30 min，停滯2 d，然後以1.5 ~ 2.0 L/h的速度（dù）恢複循環5 d。接種後的培養基在主汙染回路循環的同時，在5-L瓶中填充新鮮的生物膜培養基，用（yòng）第二蠕動泵以125 mL/h的（de）速度泵送內容（róng）物，為熒光假單胞菌繼續生長添加新的營養物質(圖2)。

在生物膜發育（yù）過程中，生物膜樣品(即汙染回路不鏽鋼管)在以下時間點取出:循環（huán）開始前(即2天停滯孵化後)和（hé）循環5天期間每天取出。每個生物膜樣品由2管組成，一管用（yòng）於熒光假單胞菌（jun1）計數，另一管用於掃描電鏡檢查。

2.6. 使用臭氧輔助CIP去除食（shí）品加工設備中（zhōng）的熒光（guāng）假單胞（bāo）菌生物膜

在進行實（shí）驗之前，用（yòng）洗滌劑溶液清洗所有加工（gōng）設備的元件並漂洗。除產品罐外（wài），這些元（yuán）件在121°C下高壓滅菌30分鍾。在實施CIP之前，為了（le）在設備上形成生物膜，在罐和出口管道之間添加汙染液，並允（yǔn）許流過填料、旁路、5.08厘米的（de）小管段和彎頭，然（rán）後返回汙染回路（lù）。初步試驗表明（míng），該加工槽易（yì）於清洗，因此，該加工槽出口管道是（shì）研究的主要對象。因此，受（shòu）汙染的部（bù）件為t形管(8)、旁通閥（fá）(9)、填料(10)、旁通（tōng）管（guǎn）線(11)、4個表麵粗（cū）糙的小管（guǎn）段(12)和4個表麵光滑的（de）90°彎頭(13)。接（jiē）種後的生物膜培養基先在循環中循（xún）環（huán）30分鍾（zhōng），停滯2天，然後（hòu）恢複循環5天，如上所述。在形成堅固的熒光假（jiǎ）單胞菌生物膜後，CIP工藝按以（yǐ）下步驟依次（cì）實施:(1)預漂洗，(2)漂洗後的堿性清洗，(3)臭氧（yǎng）消毒。管段(圖2，組件12)和彎頭(圖2，組件（jiàn）13)是用來評估CIP步驟去除熒光（guāng）假單胞菌生物（wù）膜有效性的部分。每個CIP步驟（zhòu）後，去除（chú）一個節段和肘部，替換新鮮無菌部分，並擦拭其內表麵以評估生物膜去除情況。

2.6.1. 除去

一旦生物膜形成過程完（wán）成，被汙染的處理設備連接到CIP係統，隨（suí）後去（qù）除汙染係（xì）統。采用（yòng）過濾35 μm的自來水，在22-25℃溫度下進行預升。衝洗水由水箱經CIP進口泵以（yǐ）56.7 L/min的（de）速度單次輸送，保證湍（tuān）流流動;流體的流速為1.87 m/s。衝洗時間確定為1 min，以確保去除所有乳土。

2.6.2. 堿性的（de）清潔

用水預漂洗後，將過濾35 μm的自來水與（yǔ）堿性洗滌劑(CIP 100;Steris, Mentor, OH)，達到0.2%的濃度。通過在線加熱器循環，將溶液加熱至50°C。溫度（dù）由溫度控製器(歐姆龍E5C2, Allied Electronics & Automation, Worthington, OH)管理。待溫度穩定後，向加工設備內充入堿性溶液，以56.7 L/min的速度循環2 min。清洗過程中控製溫度(50±2℃)和流速(1.87 m/s)。

2.6.3. Post-rinse

後衝洗消除了（le）被清洗係統中的堿痕跡，並冷（lěng）卻了係統，使其為臭氧（yǎng）消毒做好準備。經過35 μm過濾的自來（lái）水從用（yòng）於水預衝洗的水箱中取出。將漂洗水引入係統，並測定了溶（róng）液在進（jìn）出（chū）口線的電導率。當水電導率達到所需值(22-25℃下300-320 μsc)時，再繼續衝洗1分鍾，直至衝洗完畢（bì）並關閉水泵。水流（liú）穩定在56.7 L/min。

2.6.4. 臭氧衛生處理

在環（huán）境溫度(22-25°C)下使用臭氧（yǎng）水溶液作為消毒劑。空（kōng）氣（qì）作為臭氧發生器的入口氣（qì）體，因為它有一（yī）個集成的氧氣濃縮係統。用電（diàn）暈放電法將濃氧（yǎng）轉化為臭氧，並（bìng）借助文丘裏裝置與水混合。將臭氧水溶液（yè）儲存（cún）在臭氧-水箱中(圖1)，通過離心泵(古（gǔ）爾（ěr）茲泵型號:NPE 1ST1F1B4)在（zài）文丘裏（lǐ）腔內循環，直至達到所需濃度。過量（liàng）的臭氧由熱催化臭氧破壞（huài）裝置(Del ozone)去除。在該研究中測試了5 ppm或10 ppm的含水（shuǐ）臭氧。低濃度（dù）(5ppm)應用5min, 10ppm的臭氧溶液測試10min。溶液中臭（chòu）氧濃度由臭氧監測儀(Q450;ATI，學院維爾，賓夕法尼亞（yà）州)在進口和（hé）出口線（xiàn）。此外，通過分光光（guāng）度計（jì）(Spectronic 1201, Milton Roy Co.， Houston, TX)在258 nm (A258)處測量紫（zǐ）外吸收，采用紫外光（guāng）譜法確定了水溶液中臭氧的（de）濃度。

2.6.5. 臭（chòu）氧輔助（zhù）CIP係統的抗菌膜（mó）效果

改進的CIP係統對未附（fù）著的(浮遊)和附著的(生物膜)熒光（guāng）假單胞菌細胞群的有效性進行了（le）評估。浮遊細胞的樣本從CIP回路回路上的隔膜取樣口采集(圖1)。這些（xiē）樣本在清（qīng）洗過程開始前，在（zài）預漂洗、後（hòu）漂洗堿性清（qīng）洗和臭氧消毒後，使用（yòng）10cc注射器(Becton, Dickinson & Co.)采集。在0.1%蛋白腖水（shuǐ）中（zhōng）進行連續稀釋，並使用灌注鍍技術將（jiāng）1ml等分液與熔融TSA (Becton Dickinson & Co.)混合(Yousef et al.， 2022)。30℃孵育48 h，計數菌（jun1）落。第二種類型的采（cǎi）樣是為了（le）推斷清潔過程對生物膜細胞的有（yǒu）效性。生物膜樣品取自粗糙和光滑表麵（miàn）;這些分別（bié）是不鏽鋼節段（duàn）(圖2，組件12)和彎頭(圖2，組件13)。為了評估CIP對（duì）熒光假（jiǎ）單胞菌生物膜（mó）種群的影響，在整個清（qīng）洗過程開始前，在預漂洗、後漂洗堿性清洗和臭氧消毒後，分別去除一段和一個肘部。將切除的切片替換為（wéi）無菌切片，並恢複清洗過程。

2.7. 生（shēng）物膜（mó）的枚舉（jǔ）

為了確定汙染裝置形成的生（shēng）物膜，在5天的生物（wù）膜介質循環中，每天從汙染回路(圖2，組件7)中取出兩（liǎng）根小（xiǎo）不鏽鋼管（guǎn），以監測強健生物膜的發展。將每（měi）個不鏽鋼管無菌放入含有25 mL 0.1%蛋白腖水的50 mL螺旋蓋小瓶中。手動搖瓶，然後用另外10ml 0.1%蛋白（bái）腖（dòng）水衝洗（xǐ）試管，以去除未附著的細胞。用（yòng）兩（liǎng）根無菌（jun1）棉簽拭除管內表麵的生物膜細胞，將棉簽（qiān）尖端斷開（kāi），放入含有9ml 0.1%蛋白腖水的玻璃管中。管，包括拭子，在旋渦（wō）混合器(Fisher Scientific Industries, Inc.， Bohemia, NY)中混合約30秒。將得到的懸浮液用0.1%蛋白腖水（shuǐ）稀釋，用倒鍍法將其鍍在TSA上，並在30°C下孵育2天(Yousef et al.， 2022)。每管平均CFU換算為CFU/ cm2。

為了在臭氧輔（fǔ）助CIP過程中對熒光（guāng）p.h ncens生物膜進行計數，用三根無菌棉簽(Fisher Scientific)擦拭不鏽鋼節段和肘（zhǒu）部的內表麵（miàn），將生物膜細胞從棉簽的尖端（duān）分（fèn）離到含有25 mL 0.1%蛋白腖水的管中。包括（kuò）拭（shì）子在內的試管（guǎn）在旋渦混合器中（zhōng）混合約30秒。將得到的懸浮液用0.1%蛋白腖水稀釋後，用（yòng）倒鍍法鍍在TSA上，在30℃下孵育2天。每節平均CFU數換算為CFU/100 cm2。

2.8. 掃描（miáo）電子顯微鏡對生物膜的檢查

為（wéi）了用掃描（miáo）電鏡檢查小不（bú）鏽鋼管內的生物（wù）膜，需要一些準備;這些（xiē）準備工作按照之前的描述進行(Speers等人，1984;Latorre et al.， 2010)，並做了一些修改。從汙染係統中取出的試管，用10ml 0.1%蛋白（bái）腖水衝（chōng）洗，然後放入玻（bō）璃小瓶中。用2.5%戊二醛固（gù）定於0.1 M磷酸緩衝液中，pH為7.4的葡萄糖（táng）溶液中。試管在0.1 M磷酸鹽緩衝液中衝洗3次，每次15分鍾，然（rán）後將（jiāng）每個試（shì）管小心地縱向切成兩半。半管片在0.1 M磷酸鹽緩衝液中衝（chōng）洗三次，每次衝（chōng）洗15分鍾。將（jiāng）洗滌後的含生物（wù）膜的半管分別在增加濃度的（de）乙醇(25、50、70、85和95%)中脫水10分（fèn）鍾，然後在100%乙醇中脫水3次，每次（cì）30分鍾。將幹（gàn）燥的樣品安裝在鋁樁上，並在濺（jiàn）射塗層機(Cressington, Redding, CA)中用金塗層（céng）2分鍾。對樣品（pǐn）進行掃描電鏡成像(Nova 400 NanoSEM, FEI, Hillsboro, OR)。

2.9. 統計分析

實驗至少重複進行，並獨立重複兩次。數據用兩個獨立重（chóng）複的平均值±SD表示，使用統計軟件(GraphPad Prism 9.0.0;GraphPad軟件（jiàn）公司，聖地亞哥，加州)。采（cǎi）用方差分析(ANOVA)，采用Tukey兩兩比較，確定治療組之間或治（zhì）療（liáo）對比較的顯著性差（chà）異。p≤0.05認（rèn）為差異有統計學意義。

3.結論

在（zài）中試規模的（de）食品加工設備上開發堅固的生（shēng）物膜（mó）具有（yǒu）挑戰性;然（rán）而，克（kè）服這（zhè）一限製使我們能夠驗證臭氧輔助CIP是消除熒光假（jiǎ）單胞菌生物膜的有效方法。本研究提供的證據表明，標準的就地清洗製度使熒光假單胞菌浮遊細胞低於（yú）計數法的檢出限;然而，完全消除生物膜細胞是不可能（néng）的。在清潔過程中加入臭氧作為消（xiāo）毒劑，可以完全去除加工設備粗糙或光滑表麵上的生物膜（mó）細胞。目（mù）前的研究表明，臭氧輔助CIP可以（yǐ）成為食品加（jiā）工商（shāng）淨化加工設備的有效方法（fǎ），特別是在乳（rǔ）製品（pǐn）行業（yè）。